小鼠胚胎干细胞 (mESC) 是研究多能性和谱系分析的重要工具。

从遗传模型中衍生小鼠胚胎干细胞 (mESC) 为分析遗传变化对发育的影响提供了重要工具。它还可以提供额外银娱优越会717入口操作的工具。

我们会做什么

将从 E3.5 的感兴趣模型中收集胚胎，并在 E4.5 时从晚期囊胚中收集外胚层并转移至培养物。

每个胚胎将被单独处理，一小部分成功衍生的细胞系将提供给研究人员进行银娱优越会717入口分型。

最多可扩增 4 个 ES 细胞系，每个细胞系冷冻三瓶并提供给研究人员。

您需要提供什么

• 三只雌性小鼠进行繁殖（以及突变型繁殖雄性小鼠）。
• 证明银娱优越会717入口分型检测已到位。

特殊注意事项

调查员需要在收到样本后 24 小时内完成银娱优越会717入口分型。

创建小鼠胚胎成纤维细胞 (MEF) 使研究人员能够从转银娱优越会717入口动物中建立原代培养物。

我们会做什么

MEF 由 E13.5 或 E14.5 dpc（性交后第二天）胚胎生成。 如果细胞系的纯合性在 E13.5 之前是致死的，则可以从发育的早期阶段获得细胞，尽管成纤维细胞的产量会降低。

MEF 然后在液氮中无限期地膨胀和冷冻以供将来使用。

已知银娱优越会717入口型

如果胚胎的银娱优越会717入口型已知（即父母双方在感兴趣的银娱优越会717入口座上都是纯合的），我们将从最多三个胚胎中提取 MEF，培养并收获细胞。每个冷冻瓶最多可冷冻 5 份 3 x 10E6 或 3 x 10^6。在将细胞转移给请求者之前，将执行“解冻测试”。

未知银娱优越会717入口型

如果胚胎的银娱优越会717入口型未知（即父母是杂合子），我们将从最多 10 个胚胎中提取 MEF。请求者将被要求在 24 小时内对每个胚胎的少量样本进行银娱优越会717入口分型，我们将继续培养每种所需银娱优越会717入口型的最多三个胚胎。

您需要提供什么

• 雌性小鼠
• 用于建立 MEF 细胞系的雄性饲养员

特殊注意事项

用于此程序的动物将被分配到 GEMS 协议，因此研究人员无需为此程序编写协议或涵盖这些动物数量。

胚胎的收获可用于多种应用。

我们会做什么

将从定时怀孕的小鼠中收集胚胎并按照研究人员的要求进行处理。可以从定时怀孕的雌性小鼠的不同阶段收集胚胎。

您需要提供什么

• 用于定时怀孕的雌性小鼠
• 胚胎处理的解决方案和说明
• 针对定时怀孕雌性的动物协议

特殊注意事项

研究人员应该意识到，定时怀孕小鼠体内的胚胎数量变化很大。

二倍体胚胎/ES细胞聚集可以产生嵌合小鼠，以进行感兴趣的遗传改变。

我们会做什么

转银娱优越会717入口小鼠胚胎干细胞 (mESC) 与二倍体 CD1 胚胎聚集，生成嵌合小鼠。 ES 细胞系将​​被扩增，细胞将聚集成至少 150 个 CD1 胚胎。

聚集的胚胎将被转移到CD1假孕雌性体内。

后代将受到嵌合体监测。断奶时，嵌合体可以转移到研究者的方案中以测试种系传播，也可以维持长达两周，费用由研究者承担。

您需要提供什么

• 有支原体检测证据的 ES 细胞系（也建议进行染色体计数）
• 已计划进行筛选程序来识别转银娱优越会717入口的证据
• 创始小鼠的转移需要动物协议

特殊注意事项

请注意，该设施无法保证不同小鼠 ES 细胞和嵌合体的种系传播。

囊胚注射银娱优越会717入口改变的小鼠 ES 细胞用于产生携带银娱优越会717入口改变的嵌合小鼠。

我们会做什么

ES 细胞将被扩增用于显微注射并注射到 20-30 个白化 B6 囊胚中。然后它们将被转移到两到三只 CD1 假孕雌性体内。

后代将在断奶时接受嵌合体监测，并转移给研究者进行种系传播测试。它们也可以维持长达两周，费用由研究者承担。

您需要提供什么

• 有支原体测试证据的 ES 细胞系（也建议进行染色体计数）
• 有证据表明已计划进行筛选程序来识别转银娱优越会717入口
• 一旦有证据表明已获得种系传播，就需要动物协议

特殊注意事项

请注意，该设施无法保证不同小鼠 ES 细胞和嵌合体的种系传播。

CRISPR/Cas9 允许进行精确编辑，以创建银娱优越会717入口敲除、银娱优越会717入口敲入或条件小鼠模型。

我们会做什么

与调查员会面后，将创建模型设计。

研究人员批准设计后，将订购试剂（指导 RNA 和 ss 供体，如果适用）。

试剂的编辑效率将在体外受精制备的受精卵中进行测试。如果编辑效率可以接受，受精卵将被电穿孔并转移到假孕雌性小鼠中。

断奶后，创始人将被转移到研究者的方案或维持长达两周，费用由研究者承担。

您需要提供什么

如果要在突变背景上进行银娱优越会717入口编辑，则需要提供雌性和雄性小鼠。该设施将供应野生型 C57BL6 或 CD1 小鼠。

特殊注意事项

研究者必须准备一份动物方案来接收创始小鼠。该设施无法保证目标银娱优越会717入口将在种系中成功改变或传播。

银娱优越会717入口打靶载体或表达载体可以通过电穿孔导入ES细胞，并进行选择以用于后续筛选和聚集。

现在大多数银娱优越会717入口靶向都是使用 CRISPR/Cas9 完成的。对于需要矢量构建的专用模型，请直接联系我们讨论方法和定价。

我们会做什么

我们将与调查员会面以确定项目的范围。然后，将为每个项目单独规划策略和工作流程。

您需要提供什么

设施和调查员的角色将针对每个项目进行优化。

特殊注意事项

我们的设施不再常规使用这种方法，因为这种方法已在很大程度上被 CRISPR/Cas9 介导的小鼠银娱优越会717入口修饰所取代。

原核注射允许引入 DNA 或 RNA 以在银娱优越会717入口组中表达。

我们会做什么

原核注射通常用于将遗传物质直接注射到受精卵母细胞的细胞核中。当受精卵是单细胞时，在E0.5时收集受精卵。适当时，将线性化的DNA、RNA和/或蛋白质注射到原核之一中。然后将注射的受精卵转移到假孕小鼠体内。

在最多三个疗程中，我们会将 DNA 注射到至少 100 个受精卵中，并将它们植入假孕雌性小鼠体内。

创始人（至少三名）将受到监控。三周后，将获得耳孔并提供给研究人员进行银娱优越会717入口分型。

断奶后，创始人将被转移给研究者进行种系传播测试。

开始之前

联系我们之前，请准备好以下信息：

• 生成模型的理由
• 接收创始人小鼠的动物协议
• 转银娱优越会717入口的银娱优越会717入口分型测定

您需要提供什么

• 注射用 DNA。请咨询相关设施，了解注射用 DNA 的制备方案。如果需要，该设施可以准备、量化和消化构建体，并准备用于注射的插入物。
• 3 ug DNA，浓度为 100 ng/ul。我们将在注射缓冲液中将其稀释至 50 ng/ul 的浓度。
• 验证待注射 DNA 的质量、数量和完全消化的图片。

特殊注意事项

请注意，该设施无法保证转银娱优越会717入口将在种系中表达或传播。

胚胎冷冻允许研究人员永久储存小鼠品系。

研究者应该意识到，通过这些方法可以收集的胚胎数量在不同品系之间存在显着差异。尽管该设施尝试每行储存至少 100 个胚胎，但这并不能得到保证。

我们会做什么

根据冷冻胚胎站点提供的方案准备用于解冻胚胎的培养基。

解冻的胚胎将被移植到假孕雌性体内。

小鼠将受到监测直至分娩，并且后代的样本将在断奶时提供给研究人员进行银娱优越会717入口分型

具有所需银娱优越会717入口型的幼崽将被转移到研究人员的方案中。

您需要提供什么

• 冷冻胚胎或用于生成胚胎的雌性/雄性小鼠
• 确认后代银娱优越会717入口分型测定的可用性
• 接受后代的动物协议

特殊注意事项

该设施无法保证胚胎移植的成功。如果研究者从外部来源订购胚胎，确保供应商提供对照胚胎瓶可以增加成功的可能性。对照胚胎将用于优化条件。

卵巢冷冻允许研究人员永久储存小鼠品系。它还允许研究人员“拯救”难以繁殖的转银娱优越会717入口品系。

我们会做什么

收集卵巢后，将其切成两半，然后冷冻在冷冻管中或转移到组织相容的雌性体内。

如果卵巢被转移到另一只雌性身上，小鼠将被转移给研究人员以测试转移卵巢的活力。

小鼠的动物方案和程序以及卵巢活力的测试均由中央动物护理育种方案涵盖，直到证明感兴趣的银娱优越会717入口改变成功传递为止。

届时，调查人员需要获得批准的动物方案。

您需要提供什么

• 四到八周龄的雌性小鼠，可产生卵巢。
• 用于植入卵巢的雌性小鼠（组织相容性雌性小鼠）。

存储

冷冻的卵巢可以转移给研究者储存或储存在设施中。

特殊注意事项

• 雌性供体小鼠将被处死。
• 该设施不能保证卵巢移植的成功。 
• 调查员负责所有住房费用。

精子冷冻使研究人员能够永久储存小鼠品系。

我们会做什么

从已证明具有生育能力的雄性小鼠中收集精子。精子将被收集并冷冻在 150 ul x 6 个冷冻管中。将解冻一小瓶并测试精子活力。

您需要提供什么

• 两只已证实具有生育能力的雄性小鼠。

存储

冷冻的精子可能会被转移给研究者进行储存或储存在设施中。

特殊注意事项

为了收集精子而牺牲雄性小鼠。

我们会做什么

根据提供商提供的方案准备用于解冻精子的培养基。

新鲜或冷冻的小鼠精子将用于从超排卵雌性小鼠收集的小鼠卵母细胞的体外受精。 受精卵母细胞将被转移到假孕雌性体内。

将对小鼠进行监测直至分娩，并在断奶时向研究人员提供来自后代的样本以进行银娱优越会717入口分型。 具有所需银娱优越会717入口型的幼崽将被转移到研究人员的方案中。

您需要提供什么

• 冷冻精子或证明具有生育能力的雄性小鼠（用于精子采集）
• 确认后代银娱优越会717入口分型测定的可用性
• 接受后代的动物协议

特殊注意事项

该设施无法保证体外受精的成功。如果研究人员从外部来源订购精子，确保供应商提供对照精子样本对于增加成功的可能性非常重要。该对照精子样本将用于优化程序。